Aislamiento, purificación parcial y caracterización cinética de las proteasas presentes en el látex de los frutos de una planta del género Vasconcella

Abstract

Se caracterizó la actividad proteolítica del látex de los frutos inmaduros de toronche (Vasconcella stipulata), como especie representativa del género Vasconcella en el Ecuador. Se realizaron pruebas preliminares para optimizar las condiciones de obtención y secado del látex, con frutos de babaco y chamburo. Luego, en las condiciones optimizadas, se obtuvieron látex secos de los frutos de chamburo (V. cundinamarcencis), de col de monte (V. monoica) y de toronche (V. stipulata) y con ellos se prepararon extractos acuosos. A continuación, se purificaron dichos extractos mediante la adición de etanol al 96% y se encontró que el látex de toronche fue el más activo, con valores de 49,98 U/ml de actividad caseinolítica; 0,116 U/ml de actividad esterásica con p-NPA y 0,327 U/ml de actividad proteolítica con BApNA. Posteriormente, con el extracto de látex de toronche, se llevó a cabo una cromatografía de filtración en gel y se determinó la concentración de proteína y la actividad proteolítica de cada fracción obtenida. Con el lote formado por las fracciones más activas resultantes, se realizó una cromatografía de intercambio iónico y se encontró que la fracción más activa presentó una actividad proteolítica con BApNA de 254,55 U/ml y su actividad específica correspondiente fue 339,59 U/mg. Por último, se caracterizó cinéticamente la actividad proteolítica en la fracción más activa y se encontró que, de acuerdo con el modelo cinético de Michaelis - Menten, su Vmáx fue 159,11 U/ml y su KM 1,80 mM, a las condiciones óptimas de pH y temperatura de 7,0 y 50§ C, respectivamente.