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Título : Diseño de un sistema de purificación de inhibidores de papaína, provenientes de semillas de amaranto, arveja, chocho, fréjol, quinua o sangorache, mediante cromatografía de afinidad
Autor : Ruiz Tapia, Tannya Elizabeth
Palabras clave : BIOTECNOLOGÍA
BIOQUÍMICA
PAPAÍNA
Fecha de publicación : 4-may-2017
Editorial : Quito, 2017.
Citación : Ruiz Tapia, T. E. (2017). Diseño de un sistema de purificación de inhibidores de papaína, provenientes de semillas de amaranto, arveja, chocho, fréjol, quinua o sangorache, mediante cromatografía de afinidad. 128 hojas. Quito : EPN.
Resumen : Papain inhibitors extracts from seeds were purified and characterized by affinity chromatography with papain-glyoxyl-sepharose 6B-CL. In the first phase, a completely randomized design was used to study the effect of pH of immobilization in four levels (8, 9, 10 and 11). A pH value of 8 was selected after analyzing the percent retention of functional activity (79.42%). Also, with a completely randomized design reduction treatments with NaBH4 were evaluated with the concentration and the addition form of the reductant. The best reduction process was with 5 mg NaBH4/mL in solution, which had a retention percentage of functional activity equal to 80.67%. The aqueous extracts of amaranth and bean showed higher specific inhibitory activity of papain with 0.279 and 0.259 mU/mg, respectively. A partial purification system for the crude amaranth extract was designed with ultrafiltration at 10 kDa and precipitation with ammonium sulfate. The partial purification system for the bean extract consisted of heat treatment at 60°C and centrifugal ultrafiltration at 10 kDa. Then, the fractions were purified by affinity chromatography on papain-glyoxyl-sepharose support. The kinetic and molecular characterization determined the presence of a competitive inhibitor of 7.20 kDa in the amaranth extract and a noncompetitive inhibitor of 8.50 kDa in the bean extract.
Descripción : Se purificaron y caracterizaron extractos inhibidores de papaína provenientes de semillas, mediante cromatografía de afinidad con una matriz de papaína-glioxil-sepharosa 6B-CL. En una primera etapa y con un diseño completamente al azar, se estudió el efecto del pH de inmovilización en cuatro niveles (8, 9, 10 y 11). Se seleccionó un valor de pH de 8 tras analizar el porcentaje de retención de actividad funcional (79,42 %). También, con un diseño completamente al azar se evaluaron tratamientos de reducción con NaBH4 con la concentración y la forma de adición del reductor. El mejor proceso de reducción fue con 5 mg NaBH4/mL en solución, que tuvo un porcentaje de retención de actividad funcional igual a 80,67 %. Los extractos acuosos de amaranto y fréjol presentaron mayor actividad inhibidora específica de papaína con 0,297 y 0,259 mU/mg, respectivamente. Se diseñó un sistema de purificación parcial para el extracto crudo de amaranto con etapas de ultrafiltración a 10 kDa y precipitación con sulfato de amonio. El sistema de purificación parcial para el extracto de fréjol constó con etapas de tratamiento calórico a 60 °C y ultrafiltración centrífuga a 10 kDa. Después, las fracciones se purificaron por cromatografía de afinidad en el soporte de papaína-glioxil-sepharosa. La caracterización cinética y molecular determinó la presencia de un inhibidor competitivo de 7,20 kDa en el extracto de amaranto y un inhibidor no competitivo de 8,50 kDa en el de fréjol.
URI : http://bibdigital.epn.edu.ec/handle/15000/17272
Aparece en las colecciones: Tesis Agroindustrial (IAGRO)

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