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Título : Obtención y caracterización de inhibidores de pepsina provenientes de semillas de amaranto, arveja, chocho, fréjol, quinua o sangorache, mediante un sistema de purificación que emplee cromatografía de afinidad
Autor : Taco Jarrín, Deysi Estefanía
Palabras clave : PEPSINA
CROMATOGRAFIA
Fecha de publicación : 26-feb-2018
Editorial : Quito, 2018.
Citación : Taco Jarrín, D. E. (2018). Obtención y caracterización de inhibidores de pepsina provenientes de semillas de amaranto, arveja, chocho, fréjol, quinua o sangorache, mediante un sistema de purificación que emplee cromatografía de afinidad. 123 hojas. Quito : EPN.
Resumen : Pepsin inhibitors were obtained and characterized from certified seeds. As a first phase, the quinoa was determined as the aqueous extract with the greater specific inhibitory activity against pepsin (9,67 U/mg). Additionally, pepsin was immobilized by ion exchange in 6 mL of the DEAE-Sepharose CL-6B matrix at a selected pH of 2,0, due to the high amount of immobilized pepsin (24,72 mg) with the highest amount of functional activity retention (728 U). The partial purification of the quinoa extract was developed by centrifugal ultrafiltration which produced an AIE of 10.01 U / mg for the permeate and 9.85 U / mg for the retentate; followed by caloric treatment that achieved an AIE of 13.81 U / mg for the permeate and 18.15 U / mg for the retentate; and, saline precipitation reached an AIE of 22.25 and 22.77 U / mg for the permeate and retentate, respectively. The corresponding active fractions obtained by affinity chromatography of the semipurified permeate and retentate showed an AIE of 127.16 and 127.84 U / mg, correspondingly. The kinetic and molecular characterization determined the possible presence of a single inhibitor in the quinoa extract fractions of type non-competitive, with a molecular weight of 9.5 kDa. and an inhibition constant of 0.091 μM.
Descripción : Se obtuvieron y caracterizaron inhibidores de pepsina a partir de semillas certificadas. Como primera etapa, se determinó que el extracto acuoso de quinua presentó la mayor actividad inhibidora específica (AIE) frente a pepsina, con un valor de 9,67 U/mg. Adicionalmente, se inmovilizó pepsina por intercambio iónico en 6 mL de la matriz DEAE-Sepharosa CL-6B a un pH seleccionado de 2,0, debido a la alta cantidad de pepsina inmovilizada (24,72 mg) con la mayor cantidad de retención de actividad funcional (728 U). La purificación parcial del extracto de quinua se desarrolló mediante ultrafiltración centrífuga que produjo una AIE de 10,01 U/mg para el permeado y 9,85 U/mg para el retenido; seguida de tratamiento calórico que logró una AIE de 13,81 U/mg para el permeado y 18,15 U/mg para el retenido; y, precipitación salina que alcanzó una AIE de 22,25 y de 22,77 U/mg para el permeado y retenido, respectivamente. Las correspondientes fracciones activas obtenidas por cromatografía de afinidad del permeado y retenido semipurificados mostraron una AIE de 127,16 y 127,84 U/mg, correspondientemente. La caracterización cinética y molecular determinó la posible presencia de un solo inhibidor en las fracciones del extracto de quinua de tipo no competitivo, con un peso molecular de 9,5 kDa. y una constante de inhibición de 0,091 µM.
URI : http://bibdigital.epn.edu.ec/handle/15000/19237
Aparece en las colecciones: Tesis Agroindustrial (IAGRO)

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